酶标仪测定黄曲霉毒素的原理是什么?

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酶标仪测定黄曲霉毒素主要基于酶联免疫吸附测定(ELISA)的原理,这是一种将抗原抗体反应的特异性和酶的**催化作用相结合的分析技术,具体原理如下:
抗原抗体特异性结合:在黄曲霉毒素的检测中,首先将黄曲霉毒素的抗原包被在微孔板的表面。当加入含有黄曲霉毒素(待测抗原)的样品和一定量的酶标记抗体(酶与抗黄曲霉毒素抗体结合形成的复合物)时,样品中的黄曲霉毒素和包被在微孔板上的抗原会竞争结合酶标记抗体上的特异性结合位点。也就是说,样品中黄曲霉毒素含量越高,与酶标记抗体结合的量就越多,那么能与包被抗原结合的酶标记抗体就越少;反之,样品中黄曲霉毒素含量越低,与包被抗原结合的酶标记抗体就越多。
酶的催化作用:在抗原抗体反应完成并经过洗涤步骤去除未结合的物质后,加入酶的底物。此时,结合在微孔板上的酶标记抗体中的酶(如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等)会催化底物发生化学反应,生成有色产物。酶具有**的催化活性,少量的酶就能催化大量的底物转化为产物,而且酶促反应的程度与结合在微孔板上的酶标记抗体的量成正比。
吸光度与黄曲霉毒素含量的关系:生成的有色产物在特定波长下具有一定的吸光度,使用酶标仪在相应波长(如辣根过氧化物酶常用 450nm 波长)下测定微孔板中溶液的吸光度值。由于吸光度值与结合在微孔板上的酶标记抗体的量成正比,而酶标记抗体的结合量又与样品中黄曲霉毒素的含量成反比,所以*终测得的吸光度值与样品中黄曲霉毒素的含量呈负相关关系。通过测定一系列已知浓度的黄曲霉毒素标准品的吸光度值,绘制出标准曲线,再根据样品的吸光度值从标准曲线上计算出样品中黄曲霉毒素的含量。
简而言之,酶标仪测定黄曲霉毒素是利用抗原抗体的特异性结合以及酶对底物的催化显色反应,通过检测吸光度值来间接反映样品中黄曲霉毒素的含量。
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